实验介绍:GST pull down实验叫做蛋白质体外结合实验,是体外验证/寻找互作蛋白的技术,在体外条件下检测蛋白质与蛋白质之间相互作用的方法。通过SDS-page电泳分析,或结合WB和MS检测,可验证蛋白间的相互作用或筛选获取相应的目的蛋白,因此适用范围广。
主要应用
1、验证两个已知蛋白的相互作用
2、筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白
3、研究两个已知蛋白相互作用位点
原理
GST pull down原理示意图
利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。
客户提供
1、若是验证两种蛋白质间相互作用,需提供诱饵蛋白质及捕获蛋白质表达载体;若是验证目的蛋白与细胞裂解物蛋白互作,捕获蛋白质表达载体和含有诱饵蛋白的细胞裂解上清或者其它。若无,提供目的蛋白信息,由我公司负责构建表达载体,
2、若是验证两种蛋白质间相互作用,需提供捕获蛋白一抗。
如期提供
1、SDS-PAGE、western blot结果或质谱分析
2、实验报告